ISBN:  Unavailable

Category: Unavailable

Page count: 98

Proces gradnje in razgradnje kostnega tkiva, ki poteka vse zivljenje, imenujemo kostna remodelacija. Resorpcija kostnine poteka z osteoklasti, za tvorbo pa so odgovorni osteoblasti. Pri zdravih ljudeh je proces uravnotezen, v primeru neravnovesja pa lahko pride do poveèanja (osteopetroza, piknodizostoza) ali zmanjsanja kostne mase (osteoporoza, osteomalacija) Pri resorpciji kostnine osteoklasti v resorpcijsko lakuno sprosèajo proteolitiène encime, ki razgrajujejo organske sestavine kostnega tkiva. Med njimi ima pomembno vlogo katepsin K, ki spada v skupino lizosomalnih cisteinskih proteaz. Po aktivaciji osteoklastov se katepsin K sprosti iz lizosomov v resorpcijsko lakuno, kjer se v kislem pH okolju pretvori v zrelo (aktivno) obliko. Gen, ki kodira katepsin K, oznaèujemo s CTSK in se nahaja na kromosomu1q21. Morebitne spremembe v promotorju tega gena bi lahko vplivale nanjegovo izrazanje in posledièno na intenzivnost kostne resorpcije. V raziskavo smo vkljuèili 130 preiskovancev, in sicer 60 pomenopavznih osteoporoznih bolnic, 49 bolnikov, operiranih na kolku zaradi artroze ali osteoporoze, in 21 zdravih pomenopavznih zensk. Zaradi velikosti promotorja smo reakcijo verizne polimerizacije (PCR) izvedli v dveh delih. V prvem smo pomnozevali odsek CTSK-PR1, v drugem pa CTSK-PR2. Nato smo pomnozene vzorce pregledali na prisotnost genskih sprememb z analizo konformacijskih polimorfizmov enoveriznih DNA (SSCP). Oba odseka smo analizirali na 8 % poliakrilamidnem gelu (37Č1) brez glicerola z uporabo LB nanasalnega pufra. Zaodsek CTSK-PR1 smo izvedli elektroforezo pri 20oC, za CTSK-PR2 pa pri 9oC. Analiza pri izbranih pogojih ni pokazala razliènih vzorcev potovanja, iz èesarje bilo mogoèe sklepati, da v tem delu CTSK gena ni sprememb v nukleotidnem zaporedju. Z dvakratno sekvenèno analizo nakljuèno izbranih vzorcev (po dva vzorca za vsak odsek) smo to domnevo tudi potrdili. Na podlagidobljenih rezultatov tako lahko potrdimo odsotnost genskih sprememb v tem delu promotorja pri izbrani skupini preiskovancev.