Background: The quantity of DNA in the nuclei of the cells measured by cytometry is expressed in arbitrary units and graphically presented by histogram. The DNA value of the sample is compared with DNA value of normal cells and expressed by the DNA index. The DNA index indicates a relative levelof deviation from normal diploid cells that have, by definition, a DNA index 1. The selection of appropriate reference cells is of crucial importancefor a proper determination of DNA ploidy. In the fluid of the ovarian follicle that has been aspirated for the purposes of IVF, there is an abundant quantity of granulosa cells that are usually rejected after the removal of oocyte. The aim of our study was to find out whether these granulosa cells (GC) could be applied in the standardization of the measurements of DNA ploidy in fresh, not fixated cells by image- and flow-cytometer. We therefore analyzed the cellular content of follicular fluid, its proliferation characteristics and DNA content of the GC. Methods: In the first series we collected all aspirated follicles of one woman into thesame sample (mixed follicles). We analyzed the follicular fluid sediments of 78 women with gonadotropin stimulated menstrual cycle, 10 women with natural.

Galaktozemija je vrojena motnja presnove galaktoze, ki se deduje avtosomno recesivno. Motnje v presnovi galaktoze se pojavljajo na nivoju enega izmed treh encimovČ galaktokinaze, galaktoza-1-fosfat-uridiltransferaze (GALT) ali UDP-galaktoza-4ć-epimeraze. Najpogostejsa je napaka v delovanju encima GALT, ki katalizira prenos nukleotida iz UDP-glukoze na galaktozo-1-fosfat. Ob tem nastaneta UDP-galaktoza in glukoza-1-fosfat.Mutacije na genu za GALT lahko vodijo v spremenjeno aktivnost GALT. Najpogostejsi sta mutaciji Q188R, ki je znaèilna za klasièno obliko galaktozemije z resnimi akutnimi kliniènimi znaki in pogostimi dolgoroènimi zapleti, in N314D, ki je povezana z obièajno benignoDuarte galaktozemijo.Zaradi visoke aktivnosti GALT v zdravem jajèniku vprimerjavi z drugimi tkivi, je v primerih znizane ali odsotne aktivnosti GALT, jajènik najbolj prizadet. Pogost dolgoroèni zaplet galaktozemije je prezgodnja odpoved jajènikov, ki nastopi pri 75-96% zensk s klasièno galaktozemijo. Kaze se kot amenoreja pred 40.letom starosti, ki jo spremljata hipoestrogenizem in povisani nivoji gonadotropinov. Okvara jajènikov je posledica kopièenja galaktoze-1-fosfata in galaktitola v tkivu jajènikov ali pa zaradi strukturnih sprememb v molekuli folikle stimulirajoèega hormona (FSH), FSH receptorju ali postreceptorskem prenosu signalov.V nalogi smo ugotavljali povezavo med mutacijama Q188R in N314D ter neplodnostjo. Iz folikularne tekoèine 71 neplodnih zensk smo izolirali DNK. Z verizno reakcijo s polimerazo smo pomnozili odseka DNK na genu za GALT, kjer smo prièakovali mutacijo Q188R oziroma N314D. Pomnozeni odsek DNK, kjer smo prièakovali mutacijo Q188R, smo cepili z restrikcijsko endonukleazo HpaIIč pomnozeni odsekDNK, kjer pa smo prièakovali mutacijo N314D, smo cepili z restrikcijsko endonukleazo AvaII. Ob dejstvu, da so znizane aktivnosti encima GALT povezane z okvarami jajènikov, smo prièakovali veèjo pogostnost mutacij Q188R in N314D med neplodnimi zenskami kot v zdravi populaciji. Pri nobeni od 71 neplodnih zensk nismo nasli mutacije Q188R, zato smo ocenili, da je alelska frekvenca temutacije nizja od 0,7%. Alelska frekvenca neplodnih zensk se statistièno neznaèilno razlikuje od alelske frekvence zdrave slovenske populacije (0,29%).Doloèili pa smo 11 heterozigotk za mutacijo N314Dč pri tem pa je alelska frekvenca 7,7% statistièno neznaèilno manjsa od alelske frekvence 8,0%za slovensko populacijo. Povezave med mutacijama Q188R in N314D v genu za GALT in neplodnostjo v preiskovani skupini nismo potrdili.