No image available
No image available
No image available
No image available
No image available
No image available
No image available
No image available
Glivni melanini so rjavi ali èrni pigmenti in so pomembni virulentni dejavnikistevilnih za rastline in zivali patogenih gliv. V glivi Curvularia lunata nastaja melanin iz 1,8-dihidroksinaftalena preko pentaketidne poti, kjer sodeluje tudi encim 1,3,8-trihidroksinaftalen-reduktaza (THNR), ki katalizira pretvorbo 1,3,8-trihidroksinaftalena v vermelon. THNR je izredno zanimiva tarèa za razvoj fungicidov, saj biosinteza melanina ne poteka v gostiteljevem organizmu. Z resetanjem strukturno razliènih spojin smo v okvirudiplomske naloge iskali spojine, ki inhibirajo encim THNR iz glive Curvularia lunata. Inhibitorno aktivnost spojin smo testirali na rekombinantniTHNR, ki smo jo izolirali iz bakterije Escherichia coli, BL 21-CodonPlus(DE3)-RIL, z vstavljenim plazmidom pGex-THNR, ki nosi genski zapisza fuzijski protein med THNR in glutation transferazo. THNR katalizira oksidacijo nefizioloskega substrata 2,3-dihidro-2,5-dihidroksi-4H-benzopiran-4-ona v 4,5-dihidroksi-2H-benzopiran-2-on ob hkratni redukciji NADP+ v NADPH. Reakcijosmo spremljali spektrofotometrièno, merili smo absorbanco NADPH pri 340 nm v odsotnosti in prisotnosti testiranih spojin. Ugotovili smo, da so inhibitorji THNR strukturno razliène spojine, vendar pa imajo vse lipofilen obroè ter funkcionalne skupine, s katerimi lahko tvorijo vodikove vezi, kar jim omogoèa vezavo v aktivno mesto encima. Najmoènejsa inhibitorja sta bila etodolak in 1,3-indandion z IC50 17 M oz. 66 M. Doloèili smo tudi IC50 triciklazola, znanega inhibitorja THNR, ki znasa 215 nM. Z optimizacijo testiranih spojin bi lahko v prihodnosti razvili bolj uèinkovite inhibitorje THNR, ki bi jih lahko uporabljali za prepreèevanje in zdravljenje diseminiranefeohifomikoze, alergiènega sinusitisa, keratitisa ter drugih patoloskih stanj, ki jih povzroèajo melanizirane glive.
No image available
No image available