Quantification of Glucuronide Metabolites in Biological Matrices by LC-MS/MS.

V diplomski nalogi smo razvijali metodo za doloèanje raloksifena in njegovih glukuronidiranih metabolitov. Merjenje koncentracij metabolitov raloksifena jepomembno, ker imajo le ti zelo pomembno vlogo pri spremljanju plazemskih koncentracij raloksifena. Metaboliti se lahko dekonjugirajo in se v obliki raloksifena z enterohepatièno cirkulacijo ponovno absorbirajo in delujejo na tarène celice. Razvili smo metodo, ki nam omogoèa merjenje plazemskih koncentracij raloksifena in njegovih metabolitov pri zenskah, ki se zdravijo zraloksifenom in ki nam bo omogoèala dobiti plazemsko krivuljo. Tako bomo vedeli koliksne so koncentracije posameznega analita v doloèenem èasu po zauzitju zdravila. Tekom razvoja metode smo pripravili dve seriji umetnih plazemskih vzorcev, katerih koncentracije smo poznali. Prva serija nam je sluzila za postavitev umeritvene premice, druga pa za nadzor kakovosti meritev. Te vzorce smo potem oèistili s pomoèjo ekstrakcije na trdni fazi. Po ekstrakciji smo vzorce posusili in jih rekonstituirali v topilu, ki je bilo primerno za aplikacijo na LCžMS sistem, ter vnesli v viale. Viale smo potem vlozili v avtomatski vzorèevalnik. Z metodo gradientnega izpiranja smo analitev vzorcih loèili s tekoèinsko kromatografijo. Uporabili smo reverzno fazno kolono. Sistem za analizo in detekcijo pa je bil masni spektrometer z elektrorazprsevalno ionizacijo, ki je zelo obèutljiv in selektiven in kot tak primeren za doloèanje raloksifena in metabolitov.Metodo smo validirali in na osnovi parametrov validacije potrdili njeno selektivnost, linearnost, obmoèje linearnosti, toènost, ponovljivost, mejo kvantifikacije ter predvsem stabilnost. Metodo smo potrdili kot ustrezno za pridobivanje podatkov za plazemsko krivuljo, saj je ustrezala vsem kriterijem pri validaciji.